真菌毒素是真菌在適宜條件下產生的有毒次級代謝產物，能夠引發(fā)人類、動物各種急、慢性疾病。我國高度重視真菌毒素污染問題，GB 2761-2017 食品安全國家標準 食品中真菌毒素* 規(guī)定了食品中黃曲meidu素B1、黃曲meidu素M1、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、展青霉素、赭曲霉毒素A及玉米赤霉烯酮的*。據報道我國每年有3100萬噸糧食在生產、儲存、運輸過程中被真菌污染，約占糧食年總產量的6.2%。為了保證我國糧食質量安全，避免不必要的經濟損失，及時快速監(jiān)測真菌毒素污染種類、水平及其風險尤為重要。
由于真菌毒素種類多樣，且存在協同污染，為確保全面、快速的了解糧食中真菌毒素的污染情況，迫切需要一種簡單、快速、靈敏、同時準確測定糧食中多種真菌毒素的方法。目前真菌毒素的前處理檢測方法主要有酶聯免疫吸附法、免疫親和柱方法等。
基于抗原抗體相互作用的酶聯免疫吸附法雖有較高的選擇性，但無法準確定量，同時由于前處理簡單，沒有有效的凈化，易受基質干擾，產生假陽性。免疫親和柱前處理凈化方法由于其特異性吸附，凈化效果好，但是一方面操作復雜，另外一方面成本較高，不適合大規(guī)模檢測。
給大家分享使用QuEChERS作為前處理凈化的方法，操作簡單，重復性好，回收率高。采用Accucore aQ HPLC 色譜柱分離，表面多孔增強核技術的運用,兼容100%水相，同時增強了對極性化合物的保留及選擇性。采用LC-MS/MS方法，15min內快速完成低濃度真菌毒素的分析，該方法適合于糧谷中多種真菌毒素的分析檢測。
樣品前處理
1
樣品提取
1
稱取5g均質后的樣品放入50mL離心管中，加入10 mL 水，震搖15 min
2
再加入10mL 2%甲酸乙腈，旋渦混合1min
3
加入HyperSep萃取鹽包(P/N 60105-332-B：4g MgSO?,1g NaCl) ，快速震搖1min.
4
≥3000g 離心5min
2
樣品凈化
1
移取1mL上清液到HyperSep凈化管中（P/N：60105-204-B：QuEChERS 2mL 離心管 帶150mg MgSO?, 50mg PSA 50mg C18 ），震搖30s， ≥3000g 離心5min
2
移取500μL凈化液，使用純水稀釋4倍，過0.2μm濾膜后上機檢測
色譜條件
色譜柱 | Accucore aQ, 100 × 2.1 mm, 2.6 μm(P/N 17326-102130) |
柱溫 | 35 ℃ |
進樣量 | 10 µL |
流動相 | A0.1%甲酸水B0.1% 甲酸乙腈 |
表1.梯度洗脫程序（點擊查看大圖）
質譜條件
離子源 | 電噴霧離子源 |
質譜掃描方式 | 多重反應監(jiān)測模式（MRM） |
錐孔電壓 | 3.0kV |
加熱氣溫度 | 500℃ |
離子源溫度 | 150℃ |
脫溶劑氣 | 800L/H |
選擇反應監(jiān)測離子對信息見下表 | |
表2.化合物及質譜采集參數（點擊查看大圖）
實驗結果
標準品及樣品加標譜圖
圖1.12種真菌毒素標準溶液圖譜（濃度見表3）（點擊查看大圖）
圖2.玉米中12種真菌毒素加標圖譜（加標濃度見表3）（點擊查看大圖）
采用上述分析方法，12 種真菌毒素在15 min內均可獲得良好的色譜峰，圖1為 12種真菌毒素標準溶液圖譜（濃度見表3），各化合物靈敏度測試結果見表3，LOD在0.1-2ug/kg之間。12 種真菌毒素相對標準偏差RSD% 均小于15%（見表3）
表3.12種真菌毒素回收率數據及LOD（點擊查看大圖）
結論
開發(fā)了一種快速簡單的QuEChERS前處理方法用于糧谷中12種典型真菌毒素的分析，使用Accucure aQ表面多孔增強核色譜柱，增強了對極性化合物的保留及選擇性，峰形良好。采用LC-MS/MS方法，15min內快速完成低濃度真菌毒素的分析，并獲得較好的回收率，回收率范圍60-110%，LOD為0.1-2 ug/kg，該方法適合于糧谷中多種真菌毒素的分析。
