聯(lián)系人：王經(jīng)理
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近年來，水產(chǎn)品硝基呋喃類藥物殘留超標事件屢屢發(fā)生，嚴重威脅著人民身體健康和我國水產(chǎn)品出口貿(mào)易。鑒于硝基呋喃類藥物殘留的嚴重危害，我國農(nóng)業(yè)部于２００２年４月發(fā)布１９３號公告，公布了《食品動物禁用獸藥及其他化合物清單》，規(guī)定硝基呋喃類抗生素在所有食品動物中禁止使用，２００３年又將水產(chǎn)品硝基呋喃代謝物納入殘留監(jiān)控計劃。
目前檢測水產(chǎn)品中的硝基呋喃類化合物，可參考的國標是農(nóng)業(yè)部783號公告-1-2006水產(chǎn)品中硝基呋喃類代謝物殘留量的測定液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法。該方法將樣品肌肉組織中殘留的硝基呋喃類蛋白結(jié)合代謝物在酸性條件下水解，用2-硝基苯甲醛衍生化，然后經(jīng)乙酸乙酯液液萃取凈化后，LC-MS法檢測。該方法使用液液萃取提取，操作復雜耗時長，重現(xiàn)性差，回收率不穩(wěn)定。
本文采用HyperSep Retain PEP SPE小柱進行樣品前處理，操作簡單、省時、省力，能夠得到較高和穩(wěn)定的回收率。Retain PEP 前處理小柱對于4種硝基呋喃類藥物可實現(xiàn)0.05μg/kg的LOQ，遠遠高于國標方法的0.5μg/kg?；厥章试?9-110%之間，RSD在3-22%之間。使用Hypersil GOLD C18色譜柱，在LC/MS 上具有出色的峰形和分辨率。
樣品提取
2g 樣品中加入4mL 水，0.5mL 0.5M HCL， 加入200μL新鮮配制的50mM 鄰硝基甲苯的DMSO 衍生液，渦勻1min，在37℃水浴中避光衍生過夜（14-16 小時）。衍生后加入5mL 0.1M K2HPO4，用0.4 M NaOH調(diào)整PH到7.0-7.5，混勻后取上清液。
SPE操作步驟
60mg 3mL HyperSep Retain PEP 固相萃取柱( 貨號：60107-203):
活化
3mL 甲醇，3mL 水
上樣
樣品，1-2mL/min
清洗
5mL 水，2mL 30% 甲醇的水溶液
洗脫
5mL 乙酸乙酯
色譜條件：
色譜柱 Thermo Scientific Hypersil GOLD C18，5μm，100×2.1mm
貨號 25005-102130
流動相
A: 0.5mM 醋酸銨水溶液
B: 甲醇
梯度
進樣量 20μL
流速 250μL/min
質(zhì)譜條件：
電噴霧電離源（ESI），正離子模式
選擇反應監(jiān)控（SRM）掃描模式
噴霧電壓 5000V
離子傳輸管度 300℃
回收率：4 種硝基呋喃類藥物回收率在79%-110%, RSD 在3 到22%（n=3）。
LOQ：AHD，AO，SEM，AMO 的LOQ 0.05μg/kg。
結(jié)論
Retain PEP 前處理小柱對于4種硝基呋喃類藥物可實現(xiàn)0.05μg/kg的LOQ，回收率在79-110%之間，RSD在3-22%之間,*農(nóng)業(yè)部783號公告-1-2006水產(chǎn)品中硝基呋喃類代謝物殘留量的測定 液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法方法要求。
